不同血清型牛源巴氏杆菌多重PCR检测方法的建立

巴氏杆菌是引起牛出血性败血症的主要病原之一,其致病血清型主要有荚膜A、B和E型。本试验选择、合成了针对3种不同血清型菌株的引物,建立了检测不同血清型菌株的多重PCR鉴别诊断方法。试验用2.5ngDNA模板即可扩增出目的基因,通过对引进的参考菌株进行检测表明,用该方法进行牛源巴氏杆菌的诊断和菌株分型特异性好,敏感性高。     

羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因在杆状病毒中的串联表达

本研究通过构建含有3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组杆状病毒,旨在通过昆虫细胞表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较奠定了基础。将细粒棘球蚴EG95s基因与3拷贝羊C3d基因串联,插入pTarget载体,获得重组质粒pTarget-EG95-(C3d)3,利用BamH Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切位点将目的基因EG95-(C3d)3克隆至Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBac-Hta中,获得pFastBacHta-EG95-(C3d)3重组质粒,将该重组质粒转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中进行转座重组,获得携带3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组转座子rBacmid-EG95-(C3d)3,转染Sf9昆虫细胞后获得EG95-(C3d)3重组杆状病毒,并表达EG95- (C3d)3重组融合蛋白,采用SDS-PAGE和Western blotting进行重组蛋白的鉴定。同时利用昆虫细胞表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体进行检测。结果表明,获得了EG95-(C3d)3重组杆状病毒,且EG95-(C3d)3重组融合蛋白在Sf9昆虫细胞得到了正确表达,大小约为132 ku,Western blotting鉴定结果显示表达的EG95-(C3d)3重组融合蛋白能与细粒棘球蚴阳性血清产生特异性反应,表明EG95-(C3d)3基因表达产物具有免疫活性。同时表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体有良好的敏感性。EG95-(C3d)3基因在昆虫细胞获得表达,为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较,及细粒棘球蚴病的高效检测方法的建立奠定了基础。     

雪貂空肠弯曲杆菌的分离与鉴定

从试验用雪貂分离到一株弯曲杆菌,通过菌落、菌体形态、生化特征、培养特性等生物学特性和PCR方法对所分离菌株进行鉴定,分离株经空肠弯曲杆菌VS1基因特异性引物PCR扩增为阳性,测序结果显示与空肠弯曲杆菌序列同源性达100%,结合生物学特性和PCR结果确定所分离菌株为空肠弯曲杆菌,该菌的分离鉴定为雪貂微生物检测标准的建立提供了理论依据。     

鹦鹉热嗜性衣原体感染SPF鸡和污染相关疫苗的初步调查

为初步调查SPF鸡感染鹦鹉热嗜性衣原体状况及相关SPF鸡胚源疫苗是否出现污染,本试验通过采集不同日龄的SPF鸡血清70份、SPF种蛋卵黄膜30份,收集市场上销售的SPF鸡胚源疫苗共41支,利用国产间接血凝试剂盒检测抗体,进口免疫荧光试剂盒分别测定其抗体、抗原阳性率,以评价SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体的流行状况和相关疫苗的污染状况。本试验结果显示,SPF鸡血清阳性率分别为31.4%(荧光法)、5.7%(间接血凝法);SPF种蛋阳性率33.3%,SPF鸡胚源疫苗平均阳性率31.7%。SPF鸡已经感染了鹦鹉热嗜性衣原体,且发现经鸡胚卵黄膜而传播病原的新途径,进而造成SPF鸡胚源疫苗出现衣原体污染。因此,加强SPF鸡鹦鹉热嗜性衣原体监测已势在必行。     

猪胸膜肺炎放线杆菌血清3型间接血凝试验检测方法的建立

本试验用分离纯化的猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）3型荚膜多糖（CPS）,致敏双醛化处理的绵羊血红细胞,建立了APP的血清学诊断方法,结果表明,该方法特异性强,仅与APP 3型阳性血清反应,可以用其进行APP疫苗免疫后抗体检测,该诊断方法简单、快速,适用于临床疾病的诊断。     

92株猪腹泻大肠杆菌的耐药性分析

分析92株猪腹泻大肠杆菌的耐药性,为临床合理用药提供理论依据。采集腹泻病猪直肠拭子,分离、鉴定大肠杆菌,采用微量稀释法测定分离菌对17种抗菌药物的敏感性。结果表明,从92份腹泻直肠拭子样品中共分离鉴定出92株大肠杆菌,对17种抗菌药物的耐药率从高到低依次为磺胺甲噁唑（100%）、甲氧苄啶（100%）、卡那霉素（89%）、庆大霉素（80%）、氯霉素（78%）、链霉素（76%）、新霉素（76%）、四环素（73%）、大观霉素（72%）、恩诺沙星（66%）、氨苄西林（50%）、阿米卡星（45%）、氟苯尼考（32%）、安普霉素（27%）、利福平（23%）、头孢唑啉（22%）、头孢噻呋（0%）;所有菌株均为多重耐药菌株,92株菌的耐药谱型为81种,菌株最多对14种药物耐药,最少对3种药物耐药。研究结果表明,92株猪腹泻大肠杆菌耐药谱广,耐药率高。     

奶牛体外受精胚胎的性别控制研究

为加速母牛胚胎的生产,实现性控制胚胎产业化和体外扩繁优质品种的奶业工程发展,本研究在体外受精技术（in vitro fertilization,IVF）不断成熟和完善的基础上,通过对牛非性控IVF胚胎与常规人工受精体内胚胎移植的妊娠成功率及其两者出生后牛的性别比例进行比较分析,结果发现,两组妊娠成功率基本相同,且IVF胚胎出生的公牛比例高于体内胚;采用性控和非性控精液进行IVF试验,并对非性控IVF胚胎及性控IVF胚胎用牛Y染色体性别决定特异基因（SRY）核心序列进行分子生物学性别鉴定,结果显示,性控IVF胚胎的公牛比例显著低于普通IVF胚胎;此外,作者还比较了性控IVF与普通非性控IVF的囊胚发育率,结果显示两者并无显著差异。以上研究结果证明,体外扩繁优质良种母牛的奶业工程必须依靠性别控制体外授精技术来提高其效率和有效性。     

免疫组化法检测布氏杆菌在人工感染牛体内的分布

将布氏杆菌分不同剂量皮下注射接种于健康牛,于接种后45 d剖杀,采集相关的器官组织制备组织切片,应用免疫组化方法检查细菌在牛体内的分布。结果显示,肝脏、脾脏、肾脏、淋巴结出现强阳性信号;在高剂量注射的牛体内,肺脏、颌下淋巴结出现阳性细胞;心脏和健康牛组织呈阴性反应。阳性信号主要位于感染细胞的胞质中,偶尔出现在细胞核内。     

溶血性曼氏杆菌致病机制的研究进展

曼氏杆菌病是牛、羊等反刍动物的重要呼吸道传染病,给养牛和养羊业带来较大的经济损失,溶血性曼氏杆菌是该病的病原,作者对其生物学特性、临床症状、毒力因子、致病机制等进行简要概述,为进一步深入研究提供参考。     

发酵鸡粪中病原微生物检测方法的探讨

鸡粪发酵后作为再生饲料或有机肥已广泛使用,其中病原微生物检测尤显重要,为此本研究对发酵前后的鸡粪样品中主要病原菌大肠杆菌和沙门氏菌检测方法进行了探讨。结果表明,鸡粪样品中大肠杆菌CFU(菌落形成单位)由发酵前3.67×107个/g减少至6.33×105个/g,经发酵处理的鸡粪样品均未检出沙门氏菌,两者与发酵前样品均存在极显著差异(P0.01),说明所建立的方法可行。